Implementación de la Prueba del Multiplex PCR para el Gen DMD en Pacientes con sospecha de Distrofia Muscular de Duchenne/Becker y la identificación de una deleción de los exones 48-51
Establishment of the Multiplex PCR test for the DMD gene in patients with suspicion of Duchenne/Becker muscular dystrophy and the identification of a deletion of exons 48-51.

Diana Rojas1, María Elizabeth Narvaja2, Luis Rivas3, Maria Luisa Guevara-Fujita4, Carlos Castañeda5 y Ricardo Fujita6.

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RESUMEN
OBJETIVO

Estandarizar la prueba del Multiplex PCR para identificar las deleciones más frecuentes que incluye nueve exones: 45, 48, 19, 17, 51, 8, 12, 44 y 4 del gen DMD cuyas mutaciones producen las distrofias musculares de Duchenne y de Becker.

MATERIAL Y MÉTODO
La prueba fue realizada con 9 individuos, usando DNA obtenido de sangre periférica. De ellos, incluyendo 2 hermanos, tenían diagnóstico clínico de distrofia muscular compatible con DMD. Nueve pares de primers de los exones mencionados se usaron simultáneamente en una amplificación PCR y analizados por geles de agarosa y acrilamida. Uno de los pacientes (DMD-1) tenía diagnóstico molecular de deleción del exón 45 (control positivo) y 5 controles sanos (controles negativos).

RESULTADOS
Los controles normales mostraron segmentos normales del tamaño esperado de los 9 exones luego de la amplificación PCR. El paciente DMD-1, evidenció la deleción del exón 45 (control positivo). Uno de los pacientes (DMD-3) presentó una nueva deleción que incluyó los exones 48 a 51, el resultado fue replicado en su hermano (también afectado con DMD).

CONCLUSIONES
Se optimizó la prueba de Multiplex-PCR del gen DMD. Esto nos permite contar con una prueba para discernir gran número de pacientes con distrofia y determinar si tienen DMD/DMB. Uno de los pacientes mostró una mutación consistente en la deleción de los exones 48 a 51 que fué corroborada en su hermano afectado con distrofia. (Rev Horiz Med 2012; 12(3): 6-13)

Palabras clave:
Distrofia Muscular, Duchenne, Becker, Multiplex PCR, deleción, exón.

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ABSTRACT
OBJETIVES

To establish the Multiplex PCR test to identify the most frequent mutations caused by deletions that include DMD gene exons 45, 48, 19, 17, 51, 8, 12, 44 and 4 causing Duchenne and Becker dystrophies (DMD/BMD).

MATERIAL AND METHODS
The test was performed in DNA obtained from peripheral blood of 9 individuals, four of them (including 2 brothers) patients clinically diagnosed with muscular dystrophies compatible DMD. Nine pair of primers corresponding to the above mentioned exons were used simultaneously for PCR amplification and analyzed in agarose and polyacrilamide gel electrophoresis. One of the patients (DMD-1) used as positive control, had a previous molecular diagnosis with a deletion of exon 45.

RESULTS
Normal controls showed the expected size for the 9 segments amplified by PCR. The study of the sample of patient DMD- 1 with previous molecular diagnosis corroborated the lack of the band corresponding to exon 45. One of the patients (DMD-3) evidenced a new deletion spanning exons 48 to 51, that mutation was also replicated in his dystrophic brother.

CONCLUSIONS
We have established the Multiplex-PCR test for the DMD gene. This will enable us to have a system for the serial screening of patients suspected of Duchenne or Becker muscular dystrophy. One of the patients showed a deletion comprising exons 48 to 51, mutation corroborated in his afflicted dystrophic brother. (Rev Horiz Med 2012; 12(3): 6-13).

Key words:
Muscular Dystrophy, Duchenne, Becker, Multiplex PCR, deletion, exon.

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  1. Bióloga Genetista, Asistente, Centro de Genética y Biología Molecular (CGBM). FMH-USMP.
  2. Estudiante de Medicina USMP (Internado).
  3. Médico Cirujano, egresado de la FMH-USMP.
  4. Doctor en Ciencias, Docente Investigador, CGBM, FMH, USMP.
  5. Doctor en Medicina, Neurólogo, Clínica El Golf, Lima. Presidente Consejo Científico Asociación de Distrofia Muscular del Perú
  6. Ph.D., Docente Investigador, Director del CGBM, FMH-USMP. Vice-presidente Consejo Científico Asociación de Distrofia Muscular del Perú.

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